Instrument d'analyse des fragments

Pour extraire un mélange de fragments d'ADN, passez à travers un instrument de PCR pour effectuer une purification simple. Retirez le seul nucléotide DDNTP fluorescent libre, laissant un fragment d'ADN d'une certaine longueur, qui peut être séquencé sur la machine. Une solution de polyacrylamide est d'abord injectée dans un capillaire creux pendant le processus de séquençage. Ensuite, la solution de polyacrylamide a été ionisée par irradiation de la lumière UV pour générer une réaction de polymérisation. Le gel de polyacrylamide produit un effet de séparation sous le champ électrique pour démarrer l'électrophorèse du nucléotide. Le mouvement électrophorétique des fragments d'ADN courts est rapide et le mouvement électrophorétique des longs fragments d'ADN est lent. Le mélange de fragments d'ADN passe d'une charge négative à une charge positive sous l'action d'un champ électrique dans un capillaire contenant un gel de polyacrylamide. L'extrémité positive du capillaire est irradiée avec un laser à l'état solide, et un capteur optique spectroscopique enregistre les différentes intensités de fluorescence. Chaque fragment d'ADN, lors du passage du point de balayage laser, a un groupe fluorescent dessus, qui émettra une couleur fluorescente spécifique.

Parce que dans le processus de réaction de polymérisation précédent, le point de départ de la réaction de polymérisation commence à partir d'une position d'amorce spécifique. Par conséquent, le fragment d'ADN qui atteint d'abord le point de balayage laser de l'électrophorèse est le fragment plus court, donc sa position de terminaison de polymérisation sera plus proche de la position de début de polymérisation. Par conséquent, la couleur fluorescente reflète laquelle des bases à son extrémité 3 'est A, T, C et G.

À l'inverse, plus l'électrophorèse des fragments d'ADN atteint le point de balayage laser, plus les fragments d'ADN sont longs. En conséquence, son site de terminaison est plus éloigné de la position de départ de l'amorce. Enfin, une carte de quatre couleurs est obtenue.